• 周六. 6 月 15th, 2024

关于大肠杆菌的检测方法你了解多少

admin

3 月 6, 2024 #菌类资讯

随着人们生活水平的提高,食品安全问题越来越受到人们的关注。 在不断报道的食品安全事故中,大肠杆菌是造成这些事件的主要影响因素之一,也是衡量食品污染程度的指标。 重要参数,因此采用快速、可靠、简便的方法准确检测食品中大肠杆菌数量是否超标至关重要。 本文对大肠杆菌的传统检测方法和最新检测方法进行综述,为食品中大肠杆菌的检测提供参考。

大肠杆菌是人类和动物肠道中最著名的细菌。 它主要生活在大肠中,约占肠道细菌的1%。 它是一种革兰氏阴性短期细菌,末端钝,能活动,无孢子。 杆菌。 大肠杆菌可以合成维生素B和K,在正常生活条件下不会引起疾病; 如果进入胆囊、膀胱等处,就会引起炎症。 水和食物中的检测可被视为粪便污染的指标。 大肠菌群的数量常被用作饮用水、食品或药品的卫生标准。 大肠杆菌是国际公认的健康监测指标,因此大肠杆菌的检测技术非常重要,相应地也出现了大量的各种大肠杆菌检测方法。 下面对一些常用的大肠杆菌检测传统方法以及最近出现的新检测方法进行综述,为大肠杆菌检测技术的未来发展提供一些参考。

大肠杆菌检测的传统方法

多管发酵

多管发酵法是检测水中大肠杆菌的传统方法。 该方法是在含有荧光底物的培养基上于44.5℃连续培养24小时,然后产生葡萄糖醛酸酶,葡萄糖醛酸酶分解荧光底物。 这导致荧光产物的释放,进而导致培养基在紫外光照射下产生特征荧光。 该方法可用于对原始样品中的菌落数量进行统计估计。 一般包括以下测试:第一次发酵,在单或双乳糖胆盐发酵管中发酵; 然后进行分离培养试验,采用曙红亚甲蓝培养皿进行分离; 然后在乳糖发酵管中进行二次发酵,最后通过孢子染色、革兰氏染色、显微镜观察等即可完成。 多管发酵法对检测条件要求不高,成本低,但检测时间长,易受其他条件干扰,进而影响测量结果的准确性。

膜过滤法

该方法的基本步骤是:先将约10mL无菌稀释水加入过滤器中,然后将适量待检食品的水溶液加入过滤器中,进行抽滤,加入完成过滤前用少量无菌稀释水冲洗。 去除过滤器内壁,使水溶液中的细菌全部浓缩在滤膜上; 用灭菌镊子夹起滤膜边缘,置于M-FC培养基上。 滤膜截留细菌的一面朝上,滤膜与培养基完全紧密。 贴纸上不应有气泡。 将培养皿盖紧,置于能精确保持温度在44.5±0.5℃的恒温培养箱中。 培养24±2小时后,若粪大肠菌群变为蓝色或蓝绿色,则计数菌落数。 数字。 对于困难菌落,将可疑菌落接种到EC培养基中,44.5±0.5℃培养24±2小时,观察是否产生气体,以判断可疑菌落是否为粪大肠菌。 然后计算每升水样中粪便大肠菌群的大致数量,并最终转换为食物中含有的大肠杆菌数量。

平板计数

对于无菌平板法,用无菌移液器吸取1 mL与乳糖胆盐发酵法相同稀释度的样品溶液,转移至无菌培养皿中,并将COLI冷却至45℃。

将约10 mL ID选择性显色培养基注入培养皿中,并快速旋转培养皿以混合均匀。 凝固后,将约5 mL已冷却至45℃的培养基注入培养皿中,并快速摇匀以覆盖培养皿。 待板表面凝固后,将培养皿翻面,置于37℃培养24小时。 然后观察菌落的颜色和形状并计数。 每个稀释度平行制作 2 个培养皿。 该方法是将样品稀释到一定比例,将其中的微生物稀释分散成单个细胞,然后在一定条件下培养,直至长成肉眼可观察到的菌落。 最后,计算样品数量和稀释度。 获取单位样品中的细菌数量。

大肠杆菌检测新技术

气相色谱 (GC) 和高效液相色谱 (HPLC)

气相色谱法主要通过一系列衍生化预处理对大肠杆菌进行处理,为后续的分析和研究提供尽可能多的化学成分。 大肠杆菌的污染程度可以使用顶空气相色谱法进行分析。 其原理是利用食品密封系统顶部的微生物代谢产物CO2来分析微生物。 该方法对食品质量安全检测具有重要意义。 与上述传统技术相比,该方法具有检测速度快、灵敏度高的优点。 高效液相色谱(HPLC)主要基于离子对反相色谱的原理来分析核酸。 HPLC主要针对DNA片段的分离。 长链DNA携带更多的磷酸基团,因此更多的TEAA会与其融合,并且其在柱中的停留时间会增加。 由于乙腈具有亲水性,因此可以通过它分离DNA。 在一定的变性温度下,光谱中可出现明显的吸收峰。 该技术具有精度高、灵敏度高、成本低等优点,可以大大提高工作效率。

ATP生物发光技术

ATP生物发光技术是近年来发展迅速的一种微生物快速检测方法。 ATP是活细胞中最常见的能量代谢产物,为细胞提供各种生理活动所需的能量,其在体内的含量维持在一定范围内。 检测 ATP 含量的一种方法是荧光光度测定法。 生物发光是活细胞在荧光素酶的催化下发出的荧光。 目前使用的荧光素酶主要来源于北美萤火虫。 它是一种相对分子质量为62,000的蛋白质。 它可以催化荧光素的氧化反应。 该反应的最终产物不稳定并很快分解产生荧光。 与传统测试方法的不同之处在于,几分钟内即可得出测试结果,并且荧光计便携、易于使用,适合现场测试。 该技术可用于检测微小污染物水平以及食品加工设备和表面的清洁度测试。

PCR检测技术

聚合酶链式反应技术就是PCR(polymerase chainreaction)。 该技术由Kleppe等人首先提出。 1971年被提出,1985年才被认可为一种检测方法。PCR检测技术是一种聚合酶链式反应,通过变性、退火和延伸三个步骤使DNA基因在体外解旋和解旋,类似于体内的一种形式体外增加和复制。 理论上,一个DNA分子在2小时内可以扩增106-109倍,利用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物的荧光条带。

PCR技术目前广泛应用于生命科学的多个学科。 在食品微生物检测领域,PCR可用于快速检测食品中的微生物含量。 常用的方法包括免疫PCR、实时荧光定量PCR、多重PCR、逆转录PCR和实时定量PCR。 史云等. 建立了肉及肉制品中大肠杆菌的双重PCR检测方法,但该方法需要样品纯化时间较长,且对操作人员的专业知识要求较高。

生物传感器检测技术

生物传感器主要以生化传感技术为基础,以抗体、酶、细胞等为识别元件,是信号转换器和电子测量仪器相结合的分析工具。 目前,成熟的商用传感器包括免疫传感器、酶传感器、DNA杂交传感器、微生物传感器、分子印迹传感器等。生物传感器具有灵敏度高、选择性高、稳定性好、成本低、能够快速监测等优点。复杂系统中的在线。 目前用于信号传输的方法包括表面声波传输、电化学方法和光传输方法。 用于食品微生物检测的主要是免疫传感器和遗传传感器。 其原理是利用DNA杂交和抗原抗体反应进行检测,然后将其转化为光信号或电信号并通过仪器放大输出。 生物传感器的分子识别元件的载体可以使用多种材料,最常用的材料是光纤、荧光光度计等。尹永光等人利用抗体免疫吸附反应,采用一抗的夹心法——抗原一抗和二抗采用胶体金复合抗体作为二抗,大大提高了胶体金复合抗体的质量并延长了胶体金复合抗体与微生物的结合过程,放大和稳定了信号,从而显着提高了检测精度。

免疫磁珠技术(IMS)

免疫磁珠技术是一种分离大肠杆菌的技术。 其原理是利用磁珠作为抗体载体,将磁珠与大肠杆菌结合,利用磁力实现机械运动来分离大肠杆菌。 与其他细菌分离方法相比,免疫磁珠技术大大提高了样品中致病性副溶血性弧菌的检测效率。 免疫磁珠技术可以快速处理不同菌株样品中的不同微生物。 该方法可以大大提高检测效率。